用組織培養法繁殖葡萄,可達到優良葡萄快速育苗的目的,以滿足生產需要。同時也是工廠化育苗和脫毒苗木快速繁殖的重要手段,并能常年進行,縮短了苗木繁殖周期,加快新品種的推廣應用。
(1)試管苗的初代培養
植物組織培養是無菌地培養植物的技術,因此,離體進行葡萄試管繁殖,脫除病毒,胚胎花藥和子房培養,細胞和原生質培養,離體保存等,都必須使用無菌材料。葡萄組織初代培養,繁殖材料多取自大田,常帶有大量細菌和霉菌,必須進行消毒方可獲得無菌材料。
材料采集在組培前3天的晴天上午,取帶腋芽的葡萄半木質嫩莖,剪取后立即拿入室內,先用自來水反復沖洗,除去病蟲枝、傷殘,減除大葉片,裝入廣口瓶進行消毒。
用無菌操作技術,倒入無菌水浸泡和沖洗;倒去無菌水,加入0.1%升汞浸泡材料,并劇烈搖動6~9分鐘,剪去受傷端面,剪成單芽莖段,接入培養基中。每瓶一段,正插入內。標號后放到培養室培養,一周后檢查,如未污染,基本上不會再污染。
(2)試管苗的繼代繁殖
對初代培養合格或引進的試管苗,一般采用ms、b5、gs等培養基。具體做法如下:
①穿好工作服,戴上工作帽,用潔凈的水洗手,再用75%的酒精棉球擦手消毒;②取無菌原種苗瓶放于超凈臺,用70%酒精棉球仔細擦拭包頭紙及苗瓶外體,并解開包頭紙捆扎線繩;
③將彎剪刀、槍狀鑷子浸入75%酒精中,用時取出在火焰上燒15~30秒,晾涼備用;
④將無菌原種苗瓶的包頭紙連棉塞一同拔下,放在超凈臺一旁,瓶口在火焰上燒5~10秒,用冷卻的剪刀將瓶內小苗剪成單芽莖段,下端稍長,上端較短,但剪口距芽至少0.5厘米以上。母株基部要留一個芽,使其再發。剪下的單芽莖段,用無菌鑷子逐個夾出,放入新的培養基瓶內,并使葉子和芽露出培養基。150毫升三角瓶插5個左右莖段,插完后將瓶口在火焰上轉動燒一圈,旋好棉塞和包上包頭紙,用繩扎好,注明品種名稱和時間等。如此反復地接好所有苗子,并放到培養室。一般每月轉接增殖3次。
(3)試管苗的培養
將接種后的培養苗瓶,放在培養室的架上,培養室晝夜溫度保持在22~28℃,新轉接的苗瓶應放在培養架上層,上層溫度略高易于生根。相對濕度以70%為宜,光照2000~3000勒克斯。
(4)移栽
移栽多在冬季或春季進行。
①光培煉苗。培養室培養的試管苗生長達瓶口、有3~4枚正常葉片時,根系生長良好,連同培養瓶轉入溫室或大棚內,逐步去掉瓶塞,放在干凈的溫室中,2萬~4萬勒克斯的自然光下煉苗5~7天。當瓶口長出油亮的葉片、幼莖變淡紅色時即可出瓶。
②沙培煉苗。最好備有下鋪電熱線并能調節溫度的沙床,使床溫維持在25℃左右,以0.6厘米間距布置電熱線,其上鋪墊2厘米的土,壓平,再鋪8~10厘米的干凈細河沙,濕度在12%左右,即手捏成團落地能散。